Optimización de una técnica de medida de disrupción endocrina por medio de Saccharomyces cerevisiae recombinantes
DOI:
https://doi.org/10.26461/05.05Resumen
Los disruptores endocrinos son sustancias químicas, exógenas al organismo, capaces de alterar la homeostasis del sistema endocrino-reproductivo. Un grupo de ellos, los compuestos estrogénicos, pueden ocasionar efectos negativos sobre la capacidad reproductiva de algunos peces, disminución de la fertilidad, la aptitud sexual y la producción de esperma y feminización de los machos. En este trabajo se describe el desempeno analítico de un método para la cuantificación de estrogenicidad en aguas. Se utilizó la técnica Yeast Estrogen Screen (YES) con Saccharomyces cerevisiae recombinante, una levadura modificada genéticamente que expresa el receptor de estrógenos humano y un plasmido de expresión con el gen reportero lacZ, bajo el control de elementos de respuesta a estrógenos. Dicho gen codifica para la ƒÀ-galactosidasa, que se secreta al medio y metaboliza un sustrato cromogénico, observandose un cambio de color que se mide a 420 nm. Se utilizaron estándares de 17 ƒÀ-estradiol para realizar una curva de calibración en el rango de concentraciones entre 1.75 ng/l y 7.5 ƒÊg/l. Las curvas sigmoides dosis.respuesta obtenidas se ajustaron mediante la función de Hill y los r2 fueron mayores a 0,95. El limite de detección fue de 55 ng/l. La estrogenicidad para las muestras ensayadas fue no detectable.
Descargas
Citas
ARNOLD, S.; COLLINS, B.; ROBINSON, M.; GUILLETTE, L.; MCLACHLAN J. Differential interaction of natural and synthetic estrogens with extracellular binding proteins in a yeast estrogen screen. En: Steroids. 1996, 61(11):642–646.
BIALES, A.; BENCIC, D.; FLICK, R.; LAZORCHAK, J.; LATTIER, D. Quantification and associated variability of induced vitellogenin gene transcripts in fathead minnow (Pimefales promelas) by quantitative real-time polymerase chain reaction assay. En: Environmental Toxicology and Chemistry. 2007, 26(2):287–296.
BUCKLEY, J. Quantifying the antiestrogen activity of wastewater treatment plant effluent using the yeast estrogen screen. En: Environmental Toxicology and Chemistry. 2010, 29:73–78.
CONROY, O.; QUANRUD, D.; ELA, W.; WICKE, D.; LANSEY, K. Y ARNOLD, R. Fate of wastewater hER-agonists and h-ER antagonists during soil aquifer treatment. En: Environmental Toxicology and Chemistry. 2005, 39:2287–2293.
DE BOEVER, P.; PIETERS, G.; SICILIANO, S.; D’HOOGE, W.; VERSTRAET, W. Optimization of a yeast estrogen screen and its applicability to study the release of estrogenic isoflavones from a soygerm powder. En: Environmental Health Perspectives. 2001, 109(7):691-697.
CANADA. ENVIRONMENT CANADA. Guidance document on statistical methods for environmental toxicity test. Ottawa: Environment Canada, 2007. (Environmental Protection Series; 1/RM/46)
GAIDO, K.; LEONEL, L.; LOVELL, S.; GOULD, J.; BABAI, D.; PORTIER, C.; MCDONNELL, D. Evaluation of chemicals with endocrine modulating activity in a yeast-based steroid hormone receptor gene transcription assay. En: Toxicology and Applied Pharmacology. 1997, 143(1):205–212.
JOBLING, S.; COEY, S.; WHITMORE, J. G.; KIME, D. E.; VAN LOOK, K.J.W.; MCALLISTER, B.G.; BERESFORD, N.; HENSHAW, A.C.; BRIGHTY, G.; TYLER, C.R.; SUMPTER, J. P. Wild intersex roach (Rutilus rutilus) have reduced fertility. En: Biology of Reproduction. 2002, 67(2):515–524.
KRISTENSEN, T.; BAATRUP, E.; BAYLEY, M. 17β Ethinylestradiol reduces the competitive reproductive fitness of the male guppy (Poecilia reticulata). En: Biology of Reproduction.2005, 72(1):150–156.
LANGE, R.; HUTCHINSON, T.; CROUDACE, C.; SIEGMUND, F.; SCHWEINFURTH, H.; HAMPE, P.; PANTER, G.; SUMPTER, J. Effects of the synthetic estrogen 17 α ethinylestradiol on the life-cycle of the fathead minnow (Pimephales promelas). En: Environmental Toxicolgyand Chemistry. 2001, 20(6):2001–2012.
LORENZEN, A.; HENDEL, J.; CONN, K.; BITTMAN, S.; KWABIAH, A.; LAZAROVITZ, G.; MASSÉ, D.; MCALLISTER, T.; TOPP, E. Survey of hormone activities in municipal biosolids and animal manures. En: Environmental Toxicoly. 2004, (19):216–225.
NELSON, James. Screening of endocrine disrupting compounds using estrogen receptor transcriptional activation in vitro bioassay. Burnaby: Symon Fraser University, 2007. (Thesis of Master Science)
OLEA SERRANO, N.; ZULUAGA, A. Exposición infantil a disruptores endocrinos. En: An Esp Pediatr. 2001, 54(1):58-62.
PARROTT, J.L.; BLUNT, B.R. Life-cycle exposure of fathead minnows (Pimephales promelas) to an ethinylestradiol concentration below 1 ng/L reduces egg fertilization success and demasculinizes males. En: Environmental Toxicoly. 2005, 20(2):131-141.
PAWLOWSKI, S.; TERNES, T.; BONERZ, M.; RASTALL, A.; ERDINGER, L.; BRAUNBECK, T. Estrogenicity of solid phase-extracted water samples from two municipal sewage treatment plant effluents and river Rhine water using the yeast estrogen screen. En: Toxicology in Vitro. 2004, 18(1):129-138.
ROUTLEDGE, J.; SUMPTER, J. Estrogenic activity of surfactants and some of their degradation products assessed using a recombinant yeast screen. En: Environmental Toxicology and Chemistry. 1996, 15(3):241-248.
THERMO FISHER SCIENTIFIC. Yeast β galactosidase microplate plate assay protocol (non-stopped). En: THERMO FISHER SCIENTIFIC. Yeast β galactosidase assay kit instructions. Rockford: Pierce Biotechnology, 2010. (Nº 75768)
UNIVERSIDAD DE SALAMANCA. Paquete estadístico Simfit. [En línea]. Salamanca: Universidad de Salamanca, [s.d]. [Consulta junio 2010]. Disponible en: http://simfit.usal.es/
WOLFAND, J.; MARYLAND, B. Active ingredient in oral contraceptives (17alfa-ethinylestradiol) alters male competitive courtship behaviors and secondary sexual characteristics in fathead minnows (Pimephales promelas). En: Journal of the U.S. SJWP. 2007.
Descargas
Cómo citar
Número
Sección
Licencia
Los autores del manuscrito declaran conocer y aceptar los siguientes términos de responsabilidad:
Haber participado lo suficiente en el trabajo como para hacer pública la responsabilidad por su contenido.
Que el manuscrito representa un trabajo original que no fue publicado ni está siendo considerado por otra revista para su publicación, en parte o en forma íntegra, tanto impresa como electrónica.
Que en caso de ser solicitado, procurará o cooperará en la obtención y suministro de datos sobre los cuales el manuscrito esté basado.
Declara que la información divulgada que pudiera pertenecer a un tercero cuenta con la autorización correspondiente.
Autorización para la publicación y compromiso de cita de primera publicación
Los autores/as conservan los derechos de autor y ceden a la revista INNOTEC / INNOTEC Gestión el derecho de la primera publicación, con el trabajo registrado con la licencia de atribución Creative Commons Reconocimiento-NoComercial 4.0 Internacional. Creative Commons, que permite a terceros utilizar lo publicado siempre que mencionen la autoría del trabajo y a la primera publicación en esta revista sin fines comerciales.
El autor se compromete a realizar la cita completa de la edición institucional de esta primer publicación en las siguientes publicaciones -completas o parciales- efectuadas en cualquier otro medio de divulgación, impreso o electrónico.
Los autores/as pueden realizar otros acuerdos contractuales no comerciales independientes y adicionales para la distribución no exclusiva de la versión del artículo publicado en esta revista (p. ej., incluirlo en un repositorio institucional o publicarlo en un libro) siempre que indiquen claramente que el trabajo se publicó por primera vez en esta revista.
Se permite a los autores/as publicar su trabajo en Internet (por ejemplo en páginas institucionales o personales) antes y durante el proceso de revisión, ya que puede conducir a intercambios productivos y a una mayor y más rápida difusión del trabajo publicado (vea The Effect of Open Access). A su vez los autores/as autorizan al LATU a publicar el trabajo en su repositorio digital.
Los conceptos y opiniones vertidos en los artículos son de responsabilidad de sus autores.
Este obra está bajo una licencia Reconocimiento-NoComercial 4.0 Internacional.
